Bestimmung des Phenolgehaltes
Der Gesamtphenolgehalt wurde mit der Reagenzienmethode nach Folin-Ciocalteu bestimmt. 1 ml der individuellen Extraktlösung in geeigneter Verdünnung wurde mit 500 µl Folin-Ciocalteu-Reagenz und 7,5 ml doppelt entionisiertem Wasser gemischt. Zu diesem Gemisch wurde ein Milliliter einer 5%igen Na2CO3 (W/V)-Lösung hinzugefügt, und das Gemisch wurde 90 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubiert.
Die Absorption wurde gemessen, und der Gesamtphenolgehalt wurde in μg Gallussäureäquivalente (GAE) pro mg Extrakt angegeben.
Gesamtgehalt an Flavonoiden
Die Aluminiumchlorid-Methode wird zur Bestimmung des Gesamtflavonoidgehalts verwendet. 0,5 mL Extraktlösungen werden mit 1,5 mL 95%igem Ethanol (V/V), 0,1 mL 10%igem Aluminiumchlorid (m/V), 0,1 mL 1 mol L-1 Kaliumacetat und 2,8 mL Wasser vermischt. Die resultierende Mischung wird wie zuvor 30 Minuten lang bei Raumtemperatur bebrütet. Die Absorption wird mit einem Spektralphotometer gemessen, und der Gesamtgehalt an Flavonoiden wird in µg Quercetin-Äquivalenten (QEs) pro mg Pflanzenextrakt angegeben.
HPLC-Analyse der phenolischen Verbindungen
Das Hydrolyseverfahren für die Blattextrakte von A. rutifolia entspricht den Methoden
dieser Studie mit den Blattextrakten von Mengkudu.
50 g der Extrakte der Testprobe werden in 24 ml Methanol gelöst, um eine Homogenisierung zu ermöglichen. 16 mL destilliertes Wasser und 10 mL 6M HCl werden hinzugefügt. Anschließend wird die Lösung 2 Stunden lang bei 95 °C thermostatisiert. Danach wird die Lösung filtriert und anschließend mit Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) analysiert.
Die Auftrennung der Pflanzenproben erfolgt mit der Gradienten-HPLC. Es werden die Phenolsäure- und Flavonoid-Identitäten bestimmt sowie
die Nachweisgrenze (LOD) und
die Bestimmungsgrenze (LOQ) berechnet.
Freie Radikale einfangende Aktivität (DPPH-Assay)
Dieser Test wird nach den Methoden durchgeführt, die in der Studie zur
Untersuchung der antioxidativen Eigenschaften der Blüten und Wurzeln von Pyrostegia venusta (Ker Gawl) Miers angewandt wurden.
Die Extraktlösung wird mit gleichen Volumina einer 100 µM DPPH-Lösung in Methanol gemischt, wobei die resultierende Mischung 15 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubiert wird. Die Absorption wird mit einem UV-Spektralphotometer bei 517 nm aufgezeichnet.
Eisen(III)-Reduktions-Antioxidationsmittel-Leistung (FRAP)-Test
Das Reduktionsvermögen wurde mit Hilfe des FRAP-Tests (Ferric Reducing Antioxidant Power) bestimmt. Ausführliche Informationen dazu finden Sie in der
Studie über die antioxidative und antibakterielle Aktivität von Blättern der Etlingera-Arten (Zingiberaceae).
Die Absorption der Reaktionsmischungen, deren Einzelheiten und Schritte im
Bericht näher erläutert werden, wird mit einem auf 700 nm eingestellten UV-Vis-Spektrophotometer gemessen. Die gesamte Oxidationsmittelaktivität wird aufgezeichnet und der Gesamtgehalt an Oxidationsmitteln als mg Gallussäureäquivalent/g Pflanzenextrakt dokumentiert.
Antimikrobielle Aktivität
Um die antimikrobielle Aktivität der Blattextrakte von A. rutifolia berechnen zu können, verwenden die Forscher in diesem Schritt den
Agar-Diskus-Diffusionstest, bei dem Nährstoffagar und Kartoffeldextrose beimpft werden. Anschließend werden diese in sterilisierte Petrischalen gegeben und die Extrakte werden mit Dimethylsulfoxid (DMSO) in biologischer Qualität verdünnt. Sterile Filterscheiben, die mit 50 µl verdünnter Pflanzenextraktlösung imprägniert wurden, werden dann in die oben genannten Petriplatten gelegt. Diese werden für 24 Stunden bei 37°C und für 48 Stunden bei 27°C bebrütet. Später werden die antibakteriellen und antimykotischen Aktivitäten mit einem Zonenlesegerät bestimmt.
Schätzung der minimalen Hemmkonzentration (MHK)
Die Berechnung der minimalen Hemmkonzentration (MHK) erfolgte nach der Methode der Brühe-Mikrodilution. Nach dem Versuch werden die Platten bei 37°C für 24 Stunden für Bakterien und bei 27°C für 48 Stunden für Pilze bebrütet. Es wurde festgestellt, dass der Grund für den Farbwechsel des Indikators Resazurin je nach mikrobiellem Wachstum variiert.
